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摘要:目的:建立农杆菌介导的大豆水培法转化系统 方法:将大豆成熟种子接种在培养基M进行萌发,然后用农杆菌侵染大豆子叶节,共培养后转入hoagland+1.0mg/L6-BA+100mg/L卡那霉素的培养液中进行芽诱导,再转入hoagland+1.0mg/L IBA+100mg/L卡那霉素的培养液中进行生根诱导。结果:获得了卡那霉素抗性苗,分子结果检测表明,外源基因已经整合进大豆基因组。结论:农杆菌介导的大豆水培法转化系统与传统的大豆遗传转化体系相比,更加快速、高效,可为大豆转基因、突变体构建等基因组学研究提供技术平台。 关键词:大豆;子叶节;转化;hoagland水培法
目录 摘要 Abstract 1. 材料与方法-2 1.1 实验材料-2 1.1.1 受体大豆材料-2 1.1.2 质粒和菌株-2 1.2 植物组织培养基-2 1.2.1 Hoagland培养液-2 1.2.2 大豆种子萌发培养基M-2 1.2.3 共培养培养基G-3 1.2.4 芽诱导培养基Y-3 1.2.5 生根培养基S-3 1.2.6 LB 液体培养基-3 1.2.7 LB固体培养基-3 1.3 试验方法-3 1.3.1 农杆菌液制备-3 1.3.2 大豆种子消毒及萌发-3 1.3.3 农杆菌侵染外植体及共培养-3 1.3.4 转化体的抗性筛选-3 1.3.5 再生转化植株的PCR检测-4 2 结果与分析-4 2.1 芽诱导培养基中6-BA浓度的确定-4 2.2 卡那霉素(Km)筛选方法及浓度的确定-5 2.3抗性植株的获得及转基因植株的检测-6 2.3.1抗性植株的获得-6 2.3.2 转基因植株的检测-6 3. 讨论-7 参考文献-7 致谢-9 |