摘要:采用海藻酸钠和氯化钙对灵芝、金针菇细胞进行共固定，研究包埋法共固定灵芝、金针菇细胞的工艺条件，探讨共固定化培养条件：pH、温度、培养时间、重复利用次数等对细胞三萜类产量的影响。实验结果表明：共固定化灵芝、金针菇细胞的最佳工艺条件为海藻酸钠浓度5.0%，氯化钙浓度2.1%，海藻酸钠与混菌比例2:1；共固定化灵芝、金针菇细胞的最佳培养条件为pH值5.5时三萜类产量为14.931µg/mL，温度27℃时三萜类产量为14.479µg/mL，培养12d三萜类产量为14.444µg/mL，接种共固定化小球50个可重复利用6次。

关键词： 灵芝；金针菇；固定化；三萜类；海藻酸钠；氯化钙

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 灵芝的概况-1

1.1.1 灵芝的活性成分及功能-1

1.2 金针菇的概况-1

1.2.1 金针菇的活性成分及功能-1

1.3 三萜类化合物-2

1.3.1 三萜类化合物的结构-2

1.3.2 三萜类化合物的功能-2

1.3.3 三萜类化合物的提取-2

1.3.4 三萜类化合物的检测方法-3

1.4 混菌发酵技术-3

1.5 固定化细胞技术-3

1.5.1 包埋法-4

1.5.2 包埋法载体的选择-4

1.5.3 海藻酸钠包埋法中的关键因素-4

1.5.4 单一的固定化细胞技术的应用前景及存在的问题-5

1.6 研究的意义-5

2 材料与方法-6

2.1实验试剂与仪器-6

2.1.1实验试剂-6

2.1.2实验仪器-6

2.2 实验方法-7

2.2.1 实验材料-7

2.2.2 灵芝、金针菇菌种的活化-7

2.2.3 灵芝、金针菇菌种的培养-7

2.3 固定化灵芝、金针菇细胞的制备-7

2.4 标准曲线的制作-8

2.5 灵芝、金针菇共固定化工艺-8

2.5.1 探索最佳海藻酸钠浓度的操作过程-8

2.5.2 探索最佳氯化钙浓度的操作过程-8

2.5.3 探索最佳菌胶比的操作过程-8

2.6 灵芝、金针菇共固定化培养-9

2.6.1 探索培养基最佳pH的操作过程-9

2.6.2 探索最佳培养温度的操作过程-9

2.6.3 探索最佳培养时间的操作过程-9

2.6.4 探索重复利用次数（稳定性）的操作过程-10

2.6.5 探索冷藏时间的操作过程-10

2.7 比色法测定三萜类含量-10

3 结果与讨论-11

3.1 标准曲线的制作-11

3.2 共固定化工艺条件的选择-11

3.2.1 海藻酸钠浓度对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-11

3.2.2 氯化钙浓度对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-13

3.2.3 菌胶比对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-14

3.3 共固定化培养条件的选择-15

3.3.1 pH对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-15

3.3.2 温度对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-16

3.3.3 时间对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-17

3.3.4 回收次数对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-18

3.3.5 冷藏时间对共固定化灵芝、金针菇细胞产胞外三萜的影响-19

3.4 共固定化灵芝、金针菇细胞的最佳条件-20

结论-22

致谢-23

参考文献-24

附录-26