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摘要:磷酸肌醇的不同磷酸化程度决定了细胞内囊泡运输的方向,决定药物进入细胞后的功能。利用植酸水解法制备不同磷酸修饰的肌醇过程不易控制,产物检测难度较大。 目的:探索植酸的水解方法及水解产物的检测方法,为开发具有不同修饰程度的肌醇产物提供参考依据。 方法:利用钒钼酸铵测定植酸的水解程度,利用分光光度法检测反应进程,利用钼酸铵显色剂对植酸及其水解产物进行检测。 结果:(1)建立了利用钒钼酸铵测定植酸水解程度的方法。根据溶液中磷酸基团占植酸中磷酸计算总量的比例,可以估算植酸降解产物的磷酸降解状态。 (2)基于植酸检测的国标方法,检测了实验条件下进行植酸研究较适宜的铁离子浓度为25-50μg/mL,并且测定出每100μg植酸能螯合三氯化铁44.20μg。 (3)利用钼酸铵建立了植酸及其水解产物显色方法,最佳条件为:钼酸铵显色剂(含6%高氯酸、10g/L钼酸铵和0.2mol/L盐酸)、喷涂法、85℃烘干2min。 结论:初步建立了植酸水解过程的监测方法,利用钼酸铵显色法检测水解产物。 关键字:植酸;植酸酶;水解;检测
目录 摘要 ABSTRACT 1 文献综述-1 1.1植酸理化性质及应用-1 1.2植酸酶理化性质及应用-1 1.3植酸水解产物功能及其应用-2 1.3.1三磷酸肌醇-2 1.3.2四磷酸肌醇和五磷酸肌醇-2 1.4植酸的水解方法研究进展-3 1.4.1酶法-3 1.4.2非酶法-3 1.5植酸水解产物的检测探究-3 1.5.1低浓度硫酸-乙醇显色-3 1.5.2磷钼酸显色-4 1.5.3钼酸铵显色-4 1.6利用分光光度法探究植酸水解程度-4 1.7研究目的-4 2.材料、仪器与方法-5 2.1材料-5 2.2试剂-5 2.3仪器设备-5 2.4实验方法-5 2.4.1定磷法检测-5 2.4.2植酸水解产物的钼酸铵显色法检测-6 2.4.3植酸水解产物的硫酸-乙醇染色法检测-7 2.4.4植酸水解产物的磷钼酸显色法检测-7 2.4.5利用铁分光光度法进行水解研究-7 3.结果分析及讨论-8 3.1植酸的水解产物制备-8 3.1.1磷的标准曲线-8 3.1.2 植酸水解(植酸酶法)-9 3.2 植酸的分光光度法检测(国标法)-11 3.2.1铁离子线性范围测定-11 3.2.2铁离子在肌醇存在条件下的显色效应特点-14 3.2.3铁离子在磷酸根存在条件下的显色效应特点-15 3.2.4铁离子在植酸存在条件下的显色效应特点-16 3.3植酸及其降解产物的染色检测-17 4.总结-19 5.参考文献-20 6.致谢-21 |