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摘要:多肽是生命科学领域的重要研究对象。目前,不论是基于多肽的蛋白质组学研究还是肽类新药开发,都已进入了微量化、高灵敏、高通量时代,然而多肽合成方法还停留在传统的大剂量、低通量阶段。发展新型多肽制备体系对解决目前多肽制备模式和应用模式不对等情况具有重要意义。 微流控芯片以反应速率快、试剂消耗小、集成通量大等优点在化学合成中极具吸引力。本课题拟探索基于全氟微流控芯片的多肽合成新体系与新方法。针对固相多肽合成多步骤、多循环、条件苛刻的特点,研制溶剂耐受型全氟结构微流控芯片。通过对压印成型、微阀制备、热压键合等机理和方法的探讨,建立全氟环氧树脂芯片制备新方法。通过多通道合成芯片及集成化进样芯片等模块的整合,发展全自动高通量微流控肽合成新体系。基于微管路流体性质及固相合成原理,对微尺度反应条件进行优化。实现高效率、并行化多肽制备,为蛋白组学研究和新药筛选中急迫的微量、高通量、高纯度的多肽需求提供应用基础。
关键词:微流控技术,全氟芯片,多肽固相合成
目录 摘要 Abstract 引言 第一章 全氟微流控芯片的设计与制作-4 1实验材料和方法-4 1.1试剂和仪器-4 1.1.1实验试剂-4 1.1.2溶液配制-4 1.1.3仪器设备-4 1.2微流控芯片图形的设计-4 1.3玻璃模板的加工制作-4 1.4玻璃芯片的多步清洗-5 1.5全氟微流控芯片的模压成型-5 1.6全氟微流控芯片的键合-6 1.7多肽合成微流控反应器系统的构建-6 2结果与讨论-6 2.1微流控芯片设计-6 2.2全氟微流控芯片的压印、键合及寿命评价-7 2.3气阀制作与性能考察-7 2.4载体束缚围堰结构-8 2.5芯片进样口的制作-9 2.6多肽合成微流控反应器系统的构建-9 第二章 基于全氟微流控芯片的固相多肽合成-10 1实验材料和方法-10 1.1试剂和仪器-10 1.1.1实验试剂-10 1.1.2 溶液配制-11 1.1.3仪器设备-11 1.2新型多肽合成树脂的制备与表征-11 1.2.1新型刚性HMP树脂的制备-11 1.2.2刚性多孔HMP树脂形貌表征-12 1.2.3刚性HMP树脂与Fmoc-氨基酸的偶联-13 1.2.4刚性树脂氨基酸键合量的测定-13 1.3基于全氟微流控芯片的固相多肽合成-13 1.3.1载体树脂的填充-13 1.3.2于新型刚性HMP树脂的单通道芯片多肽合成-13 1.3.3多肽的芯片原位裂解-14 1.4多肽合成产物的分析与表征-14 2.1刚性多孔HMP树脂的制备及形貌表征-14 2.2刚性树脂氨基酸键合量的测定-16 2.3微芯片反应器固相多肽合成-17 2.3.1反应液流速的选择-17 2.3.2偶联时间的优化-18 2.3.3多肽产物的芯片原位裂解-18 2.3.4基于全氟微流控芯片的模型多肽合成-19 2.4.1微反应器模型多肽合成产物纯度分析-21 2.4.2合成多肽产物的质谱鉴定-22 结论 参考文献 致谢 |