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摘要:采用钼蓝法对大肠杆菌植酸酶粗酶液的酶学性质进行研究,并对酶活的测定条件进行了摸索。实验结果表明:在4株待选大肠杆菌中,DH5α产酶活性最高,该菌种在LB培养基培养48h后所获得粗酶液的酶活最高,该粗酶液的最适温度是55 ℃;最适pH为2.5,在pH为7左右也可保持有较好的活性;该酶具有一定的耐热性,在65 ℃保温30 min后酶活仍能保留75%左右,之后酶活就迅速降低,75 ℃只保留30%左右;该酶对不同的pH条件有一定的抗性,在pH值2~9之间分别处理30 min、60 min,该酶依然可以保持60%以上的活性;该酶对KH2PO4抗性较差,较低浓度的KH2PO4(20mg/L)就使该酶的酶活降低到40%以下;多种金属离子没有明显的激活或抑制作用;该酶抗胃蛋白酶不抗胰蛋白酶,分别用胰蛋白酶和胃蛋白酶处理10min、20min和30min,胰蛋白酶在处理30min后只有66.69%的酶活,而胃蛋白酶处理30min后仍可保持90%以上的活性。
关键词 大肠杆菌;植酸酶;酶学性质;钼蓝法
目录 摘要 Abstract 1绪论-1 1.1 植酸酶简介-1 1.1.1 植酸酶的来源及特点-1 1.1.1.1植物植酸酶-1 1.1.1.2动物植酸酶-1 1.1.1.3 微生物植酸酶-1 1.1.2 植酸酶的种类-2 1.1.3植酸的性质和结构组成-2 1.1.4 植酸酶活的测定方法-3 1.1.5 植酸酶的应用-3 1.1.6 植酸酶的应用现状与研究方向-4 1.1.7 大肠杆菌产植酸酶应用现状-5 1.2本论文的研究意义和研究内容-5 1.2.1本论文的研究意义-5 1.2.2本论文的研究内容-5 2材料和方法-6 2.1实验材料-6 2.1.1菌种-6 2.1.2主要仪器-6 2.1.3 主要试剂-6 2.1.4 培养基-7 2.1.4.1 LB培养基-7 2.1.4.2摇瓶产酶培养基-7 2.2实验方法-7 2.2.1菌种斜面活化-7 2.2.2摇瓶发酵培养-7 2.2.3选择最佳菌种及测定发酵时间-7 2.2.4植酸酶粗酶液的提取-7 2.2.5 酸性植酸酶酶活的测定-8 2.2.5.1酶活力单位定义-8 2.2.5.2 试剂的配置-8 2.2.5.3标准曲线绘制-8 2.2.5.4样品测定-9 2.2.5.5结果计算和表示-9 2.2.6 大肠杆菌植酸酶酶学性质的研究-9 2.2.6.1酶反应的最适pH-9 2.2.6.2酶的pH稳定性-9 2.2.6.3酶反应的最适温度-9 2.2.6.4 酶的热稳定性-10 2.2.6.5金属离子对酶活的影响-10 2.2.6.6 KH2PO4对植酸酶的影响-10 2.2.6.7 胃蛋白酶和胰蛋白酶对植酸酶的影响-10 3 结果与分析-11 3.1标准曲线的绘制-11 3.2 最佳菌种及培养基的选择-11 3.3 培养时间的确定-12 3.4 培养过程中pH的变化-12 3.5最适pH的测定-13 3.6 pH的稳定性-13 3.7最适温度的确定-14 3.8温度稳定性-14 3.9 金属离子对酶活的影响-15 3.10 KH2PO4对植酸酶的影响-16 3.11 胃蛋白酶和胰蛋白酶对植酸酶的影响-16 结论-17 致谢-18 参考文献-19 |