摘 要:表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是从茶多酚中分离得到的一种儿茶素类单体。它具有较高的水溶性，但由于它的脂溶性较差，使得它在油溶性环境中的应用受到限制。酰化反应可以降低其水溶性并提高其在油溶环境中的适应性，因反应条件比较温和和酶的高度专一性，从而使得酶酰化成为了改性的首选方法，为了研究EGCG酰化反应的规律性及EGCG酰化产物的构效关系，因此对EGCG酰化产物进行有效的分离很有必要。

常规柱色谱分离过程复杂，产物得率低，而高速逆流色谱法（high-speed countercurrent chromatography,HSCCC）是近年来发展起来分离纯化生物活性物质的一项新技术，具有机溶剂消耗小、分离纯度高、环境污染少、操作简便等优点，因此本文采用高速逆流色谱法来分离丁酰化EGCG粗产物。

首先，对HSCCC分离的溶剂系统进行优化，基于洗脱时间和有效分离度的分配系数值，最终确定的溶剂系统为正己烷：乙酸乙酯：甲醇：水=1.5:5:1.5:5（v/v/v/v）。

其次，使用该溶剂系统，在加样量 50 mg，流动相流速 1.5 mL/min，柱旋转速度 790 r/min，分离温度 25 ℃ 条件下，对酰化EGCG粗产物进行分离，得到了14.2 mg的酰化产物I′和6.5 mg的酰化产物II′。

最后，采用MS、1H NMR、13C NMR 对两种酰化物鉴定为为3"-O-butyryl-EGCG（一取代物）和3′, 3″-2-O-butyryl-EGCG（二级取代产物）。

关键词：高速逆流色谱；酶催化；EGCG；分离纯化

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-4

1.1 茶多酚（Teapolyphenols）-4

1.1.1 茶多酚中的表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）-4

1.1.2 表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）酰化反应的原理和过程-4

1.2 茶多酚结构改性研究现状-5

1.2.1 茶多酚化合物结构改性概述-5

1.2.2 茶多酚结构改性国外研究进展-5

1.2.3 茶多酚结构改性国内研究进展-6

1.3 分离纯化EGCG的方法-6

1.4 高速逆流色谱（HSCCC）-7

1.4.1 高速逆流色谱的基本原理-7

1.4.2 高速逆流色谱仪器的类型-9

1.4.3 高速逆流色谱的试验方法-9

1.4.3.1 高速逆流色谱实验的常规操作流程-9

1.4.3.2 两相溶剂体系的选择-10

1.4.3.3 洗脱方式-10

1.4.3.4 运行参数的选择-10

1.4.3.5 溶剂系统的准备-11

1.4.3.6 柱系统的准备与运行-11

1.4.3.7 样品溶液的制备-11

1.4.4 高速逆流色谱在天然产物分离中的应用-11

1.5 课题研究的内容与意义-11

1.5.1 课题研究的意义-11

1.5.2 课题研究的内容-12

第2章 EGCG酰化产物的分离-12

2.1 实验试剂、仪器与设备-12

2.1.1 实验试剂-13

2.2 实验方法-14

2.2.1 高速逆流色谱实验的操作流程-14

2.2.1.1 高速逆流色谱实验洗脱方式的选择-14

2.2.1.2 样品溶液的制备-14

2.2.2 高速逆流色谱溶剂系统的选择-14

2.2.3 高速逆流色谱实验具体流程-16

2.2.4 高速逆流色谱实验上样浓度的优化-17

2.2.5 高速逆流色谱分离结果-17

图2-2 高速逆流色谱分离EGCG酰化产物的结果-17

第3章 EGCG酰化产物的结构鉴定-18

3.1 丁酰化EGCG产物分子量的测定-18

图3-1 阴离子的二级质谱图-18

图3-2 阴离子的二级质谱图-18

3.2-核磁共振技术-19

图3-3 目标化合物Ⅱ’的核磁共振氢谱图-19

第4章 结论和展望-22

4.1 结论-22

4.2 不足之处及未来展望-22

参考文献-23

致  谢-24