摘要:[目的]首先优化纤维素酶提取鼠曲草总黄酮的最佳工艺参数，然后对其进行分离纯化，最后研究了其抗氧化性和稳定性。[方法]首先研究了影响纤维素酶提取鼠曲草总黄酮的几个因素，包括酶浓度、液料比、pH值、酶解温度和酶解时间，并通过Box-Behnken试验设计与分析优化出了最佳工艺参数；然后采用AB-8型大孔吸附树脂对纤维素酶提取的总黄酮进行了分离纯化；接着分别采用DPPH自由基法、羟基自由基法研究了鼠曲草总黄酮的抗氧化性；最后研究了不同pH值、温度、金属离子、氧化剂、还原剂以及食品添加剂对鼠曲草总黄酮稳定性的影响。[结果]纤维素酶提取鼠曲草总黄酮的最佳工艺参数为酶浓度0.46%、液料比12ml/g、pH值4.5、酶解温度46.7℃和酶解时间60min，在此条件下，实际得率为1.28%，与理论值1.26%基本一致；AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鼠曲草总黄酮的最佳工艺参数为上样液pH 4.5、上样液浓度1.7mg/ml、上样液流速2BV/h、洗脱液浓度60%乙醇、洗脱液流速1BV/h和洗脱剂用量为50ml，此条件下鼠曲草纯化产品中总黄酮的纯度由3.86%提高到35.42%，提高了8.18倍；上述条件下所得的鼠曲草总黄酮对DPPH自由基和羟基自由基具有良好的清除能力，能有效地阻断亚硝胺的合成，同时对亚硝酸钠也有一定的清除能力；碱性、高温、Cu2+、Fe3+、H2O2、Na2SO3、苯甲酸钠、柠檬酸和Vc对鼠曲草黄酮的稳定性影响明显。[结论]采用纤维素酶提取鼠曲草总黄酮和AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鼠曲草总黄酮都是可行的；鼠曲草总黄酮具有一定的抗氧化性；在实际中应尽量避免影响鼠曲草总黄酮稳定性的因素。

关键词  鼠曲草；总黄酮；纤维素酶提取；分离纯化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 鼠曲草概述-1

1.2 总黄酮的概况-1

1.2.1 概述-1

1.2.2 主要结构、种类-1

1.2.3理化性质-1

1.2.4药理作用-2

1.3 总黄酮的检测方法-4

1.3.1 分光光度法-4

1.3.2 高效液相色谱法-4

1.3.3 毛细管电泳法-4

1.3.4 超临界流体色谱法-5

1.3.5 薄层扫描法-5

1.3.6 其他方法-5

1.4 总黄酮的提取方法-5

1.4.1 热水提取-5

1.4.2 有机溶剂提取-5

1.4.3 碱性稀醇提取-6

1.4.4 超声波提取-6

1.4.5 微波提取-6

1.4.6 超临界流体萃取-7

1.4.7 酶法提取-7

1.5 总黄酮的分离纯化方法-7

1.5.1 柱层析法-7

1.5.2 重结晶法-10

1.5.3 铅盐沉淀法-11

1.5.4 高效液相色谱法-11

1.6 总黄酮的抗氧化性-11

1.7 本课题的研究意义及主要内容-12

2 材料与方法-13

2.1 原料与试剂-13

2.2 仪器与设备-13

2.3 方法-13

2.3.1 酶法提取-13

2.3.2 AB-8型大孔吸附树脂分离纯化-14

2.3.3 抗氧化性的测定-16

2.3.4 稳定性的测定-17

3 结果与分析-18

3.1 纤维素酶提取鼠曲草总黄酮-18

3.1.1 单因素试验-18

3.1.2 Box-Behnken试验-20

3.2 AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鼠曲草总黄酮-22

3.2.1 静态吸附洗脱试验-22

3.2.2 动态吸附洗脱试验-23

3.2.3 鼠曲草纯度试验-26

3.3 鼠曲草总黄酮的抗氧化性试验-26

3.3.1 对DPPH自由基的清除作用-26

3.3.2 对羟基自由基的清除作用-27

3.4 鼠曲草总黄酮的稳定性试验-27

3.4.1 pH的影响-27

3.4.2 温度的影响-27

3.4.3 金属离子的影响-28

3.4.4 氧化剂和还原剂的影响-28

3.4.5 食品添加剂的影响-29

结论-30

创新点-31

致谢-32

参考文献-33