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摘要:氮素是导致水体污染的一类重要污染物。目前,由氮素污染引起的水体富营养化已成为世界性的环境问题。国内外对氮素污染的治理日益重视,生物脱氮技术因其迅速安全倍受青睐,反硝化细菌是生物脱氮技术关键载体之一,本课题就反硝化细菌的选育优化做了如下研究: 1、采用稀释平板涂布分离法从采集的土壤中筛选出3株反硝化细菌,通过16S rDNA鉴定出两株,分别为鲍曼氏不动杆菌(Acinetobacter baumannii),黄色海假单胞菌(Pseudomonas xanthomarina)。 2、以脱氮率为考核指标,比较3株细菌的反硝化能力,以鲍曼氏不动杆菌最佳,脱氮率达到78.5%。 3、以鲍曼氏不动杆菌为研究对象进行发酵条件的初步优化。通过单因素实验确定菌株生长最佳pH为5.0,最佳温度为30℃;经8因素2水平的PB实验,确定碳源丁二酸钠和氮源酵母粉是影响菌株生长的关键因素;进一步通过单因素实验逐一优化碳氮源最佳浓度,得最适发酵培养基为丁二酸钠8 g/L、酵母粉6 g/L、硝酸钠0.67 g/L、磷酸二氢钾1.36 g/L、硫酸铵0.24 g/L、硫酸镁0.2 g/L,培养条件为:pH 5.0,30℃,200 rpm。 4、最适培养条件下,鲍曼氏不动杆菌发酵液OD600达7.29,约3×108 cfu/ml,较优化前提高了217%,发酵周期为14h,72 h去氮率达92.5%。 关键词:反硝化细菌;筛选鉴定;发酵优化
目录 摘要 ABSTRACT 第1章 绪论-1 1.1 水资源危机—氮素污染-1 1.1.1 氮素污染及其危害-1 1.1.2 生物脱氮治理氮素污染-2 1.2 国内外研究现状及应用前景-2 1.2.1反硝化细菌及其作用机理-2 1.2.2 反硝化细菌的选育研究-3 1.2.3 反硝化细菌应用前景-3 1.3 本课题立题依据及内容-4 第2章 材料与方法-5 2.1实验材料-5 2.1.1土壤来源-5 2.1.2 主要仪器-5 2.1.3 主要试剂与工具酶-5 2.1.4 培养基-6 2.2实验方法-6 2.2.1 菌株的筛选与鉴定-6 2.2.2脱氮能力测定-9 2.2.3 菌株发酵条件优化-12 第3章 结果与讨论-13 3.1菌株筛选及鉴定-13 3.1.1反硝化细菌筛选及初步鉴定-13 3.1.2形态学观察及16S rDNA鉴定-13 3.1.3 反硝化能力测定-16 3.2 发酵条件优化-16 3.2.1菌株生长曲线测定-16 3.2.2 初始pH对菌株生长的影响-17 3.2.3 温度对菌株生长的影响-17 3.2.4 培养基关键成分分析实验-18 3.2.5 碳氮源添加量对菌株生长的影响-19 3.2.6 优化后菌株生长曲线与去氮能力-20 第4章结论与展望-23 4.1结论-23 4.2 不足之处及未来展望-23 参考文献-25 致 谢-26 |