摘要：本文以一株菌株Pectobacterium sp.为菌种，以发酵产物中酸性蛋白酶酶活为指标，对产酸性蛋白酶的条件进行了优化，用正交实验法确定各因素的最佳条件，从而确定最适的组合水平。结果表明，这个菌株在温度40 ℃，pH 2.5 - 3.0的酸性介质中，培养64 h，产酸性蛋白酶能力最强。Fe2+、Mn2+ 和Cu2+ 离子对该酶具有激活作用，其中0.90 mg/mL浓度Fe2+ 激活作用最强，其相对酶活达到131.5％，而Ca2+和Ni2+离子对该酶活性具有抑制作用。

关键词： Pectobacterium sp.；酸性蛋白酶；发酵条件优化；酶学性质

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 酸性蛋白酶的研究背景和研究现状-1

1.1.1 酸性蛋白酶研究背景-1

1.1.2 酸性蛋白酶研究现状-1

1.2 酸性蛋白酶催化特性-2

1.2.1 酶的催化作用-2

1.2.2 酶的作用特点-3

1.3 酸性蛋白酶活性的影响条件-3

1.3.1 温度对酸性蛋白酶活性的影响-4

1.3.2 pH对酸性蛋白酶酶活性影响-4

1.3.3 无机离子对酸性蛋白酶酶活性影响-4

1.4 提高酶产量的措施-5

1.4.1 添加诱导物-5

1.4.2 控制阻遏物浓度-5

1.4.3 表面活性剂-5

1.4.4 添加产酶促进剂-5

1.5 基因工程生产酸性蛋白酶-6

1.6 细菌在细胞内蛋白的降解途径及其分子调节机制-6

1.6.1 自噬-6

1.6.2 泛素蛋白酶体系-6

1.7 酸性蛋白酶的应用-7

1.7.1 酸性蛋白酶在酒精浓醪发酵中的应用-7

1.7.2 酸性蛋白酶在饲料工业上的应用-7

1.7.3 酸性蛋白酶在羊毛纺织品上的应用-7

1.7.4 酸性蛋白酶在食品工业中应用-7

1.7.5 酸性蛋白酶在其他方面应用-8

1.8 酸性蛋白酶的研究前景-8

2 材料与方法-9

2.1 供试菌株-9

2.2 培养基-9

2.3 主要试剂名称-9

2.4 主要仪器设备-10

2.5 实验试剂的配置-10

2.5.1 0.4 mol/L 碳酸钠溶液-10

2.5.2 0.4 mol/L 三氯乙酸溶液-10

2.5.3 10 g/L酪素溶夜-10

2.5.4 标准酪氨酸溶液-10

2.6 酸性蛋白酶发酵液中酶活的具体操作步骤-11

2.6.1 蛋白酶活力测定-11

2.6.2 标准曲线-11

2.6.3 不同的影响因子下的酶活测量-11

2.6.4 酶活力计算-12

3 结果与讨论-13

3.1 结果分析-13

3.1.1 酪氨酸标准曲线的分析-13

3.1.2 不同的影响因子对酸性蛋白酶酶活力的影响-13

3.2 讨论-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22