摘要：无花果在我国有着长远的种植历史，栽培品种亦广泛而丰富。虽然无花果蛋白酶已广泛应用于工业，但是由于无花果中无花果蛋白酶含量少，所以仍然存在提取效果差等问题。本实验目的在于研究PEG/K2HPO4双液相萃取法对无花果蛋白酶的提取效果，来为无花果蛋白酶的工业化生产提供参考。

以布兰瑞克无花果叶为原料，使用水抽提法提取得到无花果蛋白酶粗酶液，测得的△A280与无花果蛋白酶标准曲线对照得出粗酶液中酶含量。使用酪蛋白法实验得到无花果蛋白酶最适水解温度为70 ℃。然后，考察了双液相萃取中PEG分子量、PEG浓度和K2HPO4浓度对提取无花果蛋白酶的影响，并用正交实验法对提取无花果蛋白酶的工艺进行了优化。得到最佳工艺条件：PEG2000质量分数30%、K2HPO4质量分数30%、温度22 ℃和离心速率2000 r/min。在此条件下测得无花果蛋白酶的△A280为3.8246，比正交试验中计算得到的理论结果小3.4%。综上所述，使用双液相萃取法提取无花果蛋白酶是科学合理的，并且具有提取率高、操作简便、成本低廉等特点。

本实验主要问题是正交试验结果不显著，这与单因素实验的结果矛盾，这可能可以通过改变正交试验的因素(如温度或离心速率)来解决。

[关键词]双液相萃取 无花果蛋白酶 水抽提法 酪蛋白法 正交试验

目录

摘要

Abstract

1 文献综述-5

1.1萃取法-5

1.1.1简单萃取法-5

1.1.2多级逆流萃取法-6

1.1.3双液相萃取法-7

1.1.4酶促萃取法-8

1.1.5超声波辅助萃取法-8

1.1.6超临界流体萃取法-9

1.1.7反胶束萃取法-9

1.2吸附法-9

1.3膜分离法-10

1.4色谱分离法-10

1.5电化学法-10

1.6大孔树脂分离法-11

1.7化学反应分离法-11

1.8盐析法和等电点法-12

1.9其它分离法-12

1.10本项目研究的意义与创新特色-13

2 实验-13

2.1材料与设备-13

2.1.1材料与试剂-13

2.1.2设备与仪器-14

2.2方法-15

2.2.1样品处理方法-15

2.2.2溶液的配制-15

2.2.3无花果蛋白酶的提取方法-16

2.2.4双水相体系的建立和确定方法-16

2.2.5 双水相萃取操作方法-16

2.2.6双水相萃取条件的单因素考察和优化方法-17

2.2.7蛋白标准曲线的绘制方法-18

2.2.8无花果蛋白质酶活性的测定方法-18

2.2.9测定数据的处理方法-19

3结果与讨论-19

3.1无花果和蛋白酶粗提物中蛋白酶的含量测定结果与分析-19

3.2无花果蛋白酶最适温度的测定结果与分析-20

3.3不同分子量的PEG/K2HPO4体系对无花果蛋白酶的分配系数、相比及酶活的影响-20

3.4 PEG浓度对无花果蛋白酶的分配系数、相比及酶活的影响-22

3.5 K2HPO4浓度对无花果蛋白酶的分配系数、相比及酶活的影响-24

3.6双水相萃取无花果蛋白酶优化结果与分析-26

4结论-28

感谢-29

参考文献-29