条纹斑竹鲨BAFF基因的体外表达及生物学活性鉴定.doc

资料分类:农业大学 上传会员:刘教授 更新时间:2014-02-25
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摘要:本实验中,将条纹斑竹鲨CpBAFF的胞外可溶性片段与pET43.1a(+)表达载体连接形成重组质粒,在E. coliBL21表达菌株中表达出含有NusA-His6标签的重组蛋白。SDS-PAGE检测此蛋白质为83 KD,体外MTT实验表明,经镍柱-亲和层析纯化后的重组CpBAFF蛋白能和anti-IgM共同促进小鼠脾脏淋巴细胞的存活,即得到的纯化的CpsBAFF蛋白是具有生物学活性的。

关键词:条纹斑竹鲨(Chiloscyllium plagiosum)  B 淋巴细胞刺激因子  体外表达 淋巴细胞增殖

 

Abstract:In this experiment, the striped shark CpBAFF owner soluble extracellular fragment and pET43.1a (+) expression vector to form recombinant plasmid, expressed in the BL21 expression strain to contain NusA-His6 tag of the recombinant protein.By SDS-PAGE detect this protein was 83KD, in vitro MTT experiments show that, after nickel column - affinity chromatography purified recombinant CpBAFF protein and anti-IgM together can promote the survival of mouse spleen lymphocytes.

Key words: stripe spot bamboo shark( Chiloscyllium plagiosum), B lymphocytes stimulating factor, In vitro expression, lymphopoiesis

 

鲨鱼是海洋中种类不多,却富含有经济价值的一个类群。鲨鱼肉营养丰富,含高蛋白,不饱和脂肪酸和多种矿物质[8-9]。鲨鱼的富含有多种维生素和DNA,EPA等高度不饱和脂肪酸。鲨鱼的体内还含有多种活性物质,其中包括生理活性物质, 其中包括目前国内外争相研究的抗肿瘤活性成分[10-12]。本实验中为了研究软骨鱼类 BLyS 的功能和作用机制,我们把条纹斑竹鲨CpBAFF的胞外可溶性片段在大肠杆菌体内得以表达,纯化,纯化的目的蛋白对小鼠脾脏淋巴细胞体外增值实验证实,制备的sBLyS具有刺激B细胞的生物学活性,即其表达蛋白有生物学活性。

 

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上传会员 刘教授 对本文的描述:本实验中我们为了研究CpsBAFF蛋白是否具有生物学活性,我们构建了原核重组表达载体pET43.1a(+)-CpsBAFF。通常情况下蛋白高水平表达时可能以不溶的包涵体的形式存在于细胞中,而将CpsBA......
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