摘要:本论文通过液态发酵技术，分析重组P.ananatis丝氨酸蛋白酶工程菌的表达情况，通过改变pH、酶促反应温度等条件，分析重组酶的活性特征，推动新型丝氨酸蛋白酶的开发利用。结果显示，这个菌株在温度为50 ℃，pH为5时酶活力最高，达到22.17U/mL。Fe2+和Cu2+对该菌株的蛋白酶活性有促进作用，Al3+有抑制作用，而Ca2+、Mn2+、Zn2+对酶活没有明显影响。

关键词 丝氨酸蛋白酶；发酵培养；酶学性质

Abstract:This paper analysis the expression of recombinant P.ananatis serine protease engineering bacterium through the liquid fermentation technology, and study the activity characteristics of recombinant enzyme by changing the pH, enzymatic reaction temperature and other conditions which promote the development and utilization of new serine protease. The results showed that when the fermentation temperature is 50℃, pH 5, the activity of enzyme reached maximum which is 22.17 U/mL. Fe2+, Cu2+  increased the activity to some extent while the activity of serine protease was decreased after adding Al3+. Ca2+, Mn2+, Zn2+ had no significant effect on enzyme activity.

Keywords  Serine protease    Fermentation cultivation    Enzymatic properties

目录

1 绪论-1

1.1 微生物酶种类与研究进展-1

1.1.1 微生物酶种类-1

1.1.2 微生物酶的研究进展-2

1.2 丝氨酸蛋白酶种类与应用-3

1.2.1 丝氨酸蛋白酶的种类-3

1.2.2 丝氨酸蛋白酶的应用-3

1.3 重组酶表达与活性的研究技术-4

1.3.1 基因工程技术-4

1.3.2 蛋白质工程技术-5

1.4 本研究的目的与意义-5

2 材料与方法-7

2.1 实验材料-7

2.1.1 实验菌株-7

2.1.2 主要试剂-7

2.1.3 主要仪器设备-7

2.1.4 实验试剂的配制-8

2.2 培养基的配制与灭菌-8

2.2.1 培养基的配制-8

2.2.2 高压灭菌及操作台的消毒-9

2.3 重组菌株的接种与活化-10

2.4 重组菌株的液态发酵与诱导表达-10

2.4.1 重组菌株DS/BL21 丝氨酸蛋白酶诱导表达-10

2.4.2 SDS-PAGE分析-10

2.4.3 蛋白样品的准备与SDS-PAGE电泳-13

2.5 重组丝氨酸蛋白酶的活性研究-13

2.5.1 蛋白酶活性定义-13

2.5.2 福林-酚试剂法测酶活力原理-13

2.5.3 标准曲线-13

2.5.4 不同的影响因子下的酶活测量-13

2.5.5 酶活力计算-14

3 结果与讨论-15

3.1 实验结果-15

3.1.1 菌株的诱导表达-15

3.1.2 重组丝氨酸蛋白酶的活性研究-16

3.2 讨论-19

3.2.1 重组菌株诱导与表达技术-19

3.2.2 重组P. ananatis丝氨酸蛋白酶的特征与应用价值-19

结论-20

致谢-21

参考文献-22